Sắc ký cột thông thường
2. CộtCromatographic (loại xoay)
3. CộtCromatographic (Hướng dẫn)
*** Bảng giá cho toàn bộ ở trên, yêu cầu chúng tôi nhận được
Mô tả
Thông số kỹ thuật
Sắc ký cột thông thườngsử dụng sự khác biệt về tỷ lệ phân phối của các chất khác nhau giữa pha đứng yên và pha di động, hoặc khả năng duy trì khác nhau của các pha cố định so với các chất khác nhau, để đạt được sự phân tách chất. Khi hỗn hợp chảy qua cột sắc ký với pha di động, nó sẽ tương tác với pha đứng yên trong cột (như hòa tan, hấp phụ, v.v.). Do sự khác biệt về tính chất vật lý và hóa học và cấu trúc của từng thành phần trong hỗn hợp, cường độ và cường độ của các tương tác của chúng với pha đứng yên cũng khác nhau. Trong cùng một động lực, thời gian lưu của từng thành phần trong giai đoạn đứng yên là khác nhau, do đó các thành phần trong dòng hỗn hợp ra khỏi cột theo một thứ tự nhất định, đạt được sự phân tách.
Tham số
Phát hiện dư lượng thuốc trừ sâu
 |
 |
 |
 |
Chúng tôi thường nói rằngSắc ký cột thông thườnglà sự phân tách sắc ký cột, còn được gọi là sắc ký cột. Nó được các nhà khoa học Nga đầu tiên được phát minh và sử dụng vào năm 1903. Nó đã nghiền nát dung dịch các sắc tố thực vật vào bột canxi cacbonat và tìm thấy các dải màu khác nhau trên bột canxi cacbonat từ trên xuống dưới. Bằng cách tách và trích xuất các dải màu khác nhau, chất diệp lục tương đối tinh khiết, lutein, vv đã thu được.
Sau một trăm năm phát triển, phương pháp này đã trở nên tương đối trưởng thành và giai đoạn đứng yên cũng đã phát triển từ một loại bột cacbonat canxi đơn thành alumina (có thể được chia thành axit, trung tính, kiềm), silica gel, carbon hoạt hóa, vv.
Pha đứng yên (silica gel) thường cần được tinh chế và kích hoạt, và kích thước hạt phải đồng đều. Về lý thuyết, kích thước hạt càng nhỏ và diện tích bề mặt trên một đơn vị càng lớn, khả năng hấp phụ càng cao và hiệu ứng phân tách càng tốt.
Tuy nhiên, trong việc sử dụng thực tế, khi các hạt pha cố định quá nhỏ, thường có hai tình huống: một là chúng có trọng lượng nhẹ hơn và dễ dàng nổi lên trong không khí (silica gel không thể bị suy giảm bởi cơ thể con người, và càng độc hại, nó càng độc hại); Thứ hai, các hạt nhỏ cũng có thể dẫn đến các khoảng trống nhỏ giữa các hạt, dẫn đến tốc độ dòng dung môi chậm và mức tiêu thụ thời gian; Lấy silicon làm ví dụ, kích thước silicon được sử dụng thương mại lớn nhất hiện đang là lưới 200-300.
Về các phương pháp truyền cột, ngoài các thiết bị phân tích tự động như chuẩn bị lưu thông về phía trước, chuẩn bị pha chất lỏng hiệu quả và các máy truyền cột được đề cập trước đó, việc chuyển cột thủ công chủ yếu được chia thành ba loại: vượt qua cột áp suất khí quyển, đi qua cột giảm dần và cột điều áp.
Trong số đó, sự giảm dần thông qua cột dẫn đến hiệu quả hấp phụ kém do tốc độ dòng chảy nhanh của rửa giải, dẫn đến mất hầu hết số lượng khay và hiệu quả phân tách kém. Nó phù hợp để tách các mẫu với các tấm TLC tương đối mở, đặc biệt là các mẫu chỉ có một tạp chất cực lớn trong sản phẩm; Hầu hết thời gian của nó được dành cho việc xử lý trước các hợp chất, loại bỏ một số tạp chất trước khi tinh chế cẩn thận. Cần lưu ý rằng sự bay hơi dung môi gây ra bởi áp suất âm trong quá trình sử dụng có thể dẫn đến sự ngưng tụ của một số lượng lớn các giọt nước trên bề mặt ngoài của cột. Các hợp chất nhạy cảm với nước không nên dễ dàng thử.
Đi qua cột áp suất khí quyển là phương pháp phân tách hiệu quả nhất trong số ba, nhưng vì dung môi thường di chuyển quá chậm, ngay cả hiệu ứng phân tách tốt nhất cũng có thể ảnh hưởng đến hiệu quả. Do đó, áp lực thường được áp dụng tại thời điểm này, được gọi là cột có áp lực; Nhưng áp lực không nên quá cao. Nói chung, một quả bóng chuỗi đôi được sử dụng để vận hành thủ công và một máy bơm cá được sử dụng để hoạt động tự động. Cả hai có thể được sửa đổi như thể hiện trong hình.
Quy trình giao nhau cột thông thường:
Công việc chuẩn bị nên được thực hiện tốt:
Khi chọn một cột, hãy quan sát xem có bảng chà nhám hay không. Đối với các cột không có bảng chà nhám, hãy nhớ lấp đầy đáy bằng một ít bông. Bông không nên quá dày hoặc quá mỏng, miễn là nó có thể ngăn chặn silicone thoát ra. (Blogger trực tiếp tháo dỡ một móc áo quần áo và sử dụng nó để chèn bông vào ổ cắm trên phích cắm)
Chuẩn bị dung dịch rửa giải phân cực tối thiểu, đèn UV (khuyến nghị cho nhân viên phòng thí nghiệm, cầm tay, sẵn sàng chụp ảnh bất cứ lúc nào), thiết bị áp lực và giá đỡ ống thử khi cần thiết!
Chọn một cột phù hợp, thêm gel silicon, ngâm gel silicon và làm phẳng nó
Việc lựa chọnSắc ký cột thông thườngrất quan trọng và kích thước của chúng phải được tính toán dựa trên lượng sản phẩm, thường có thể được chia thành:
Một vài miligam cột (lựa chọn cuối cùng cho tổng hợp);
Một cột gồm một số hàng chục miligam (cơ chất mở rộng phương pháp);
500 miligam đến 1 gram cột (sử dụng phương pháp làm nguyên liệu thô);
Trụ cột khoảng 5g và quy mô lớn hơn.
Tỷ lệ phổ biến nhất của đường kính cột với chiều cao trong phòng thí nghiệm thường nằm trong khoảng từ 1: 2,5 đến 1:15. Lượng silica gel được sử dụng làm pha đứng yên trong quá trình tải mẫu là khoảng 20 đến 40 lần so với mẫu. Tiêu chuẩn để chọn các cột phải dựa trên tình huống leo của tấm TLC trong mẫu của bạn. Nếu có nhiều tạp chất gần nhau, hãy cố gắng chọn một cột lớn hơn càng nhiều càng tốt, để mẫu của bạn có thể được phủ một lớp mỏng nhỏ (độ dày được đề xuất dưới 5 mm). Nếu các tạp chất ở rất xa, độ dày này có thể được tăng lên một cách tự nhiên, nhưng không nên làm cho độ dày của mẫu của bạn vượt quá 2cm, trừ khi sản phẩm được rửa sạch.
Nhiều người mắc sai lầm khi nghĩ rằng thêm nhiều silicone, ngay cả khi nó dày hơn trên mẫu của tôi, nó có thể tách biệt tốt không? Câu trả lời này là tiêu cực!
Lý do là những người này không bao giờ nghĩ rằng các mẫu bên dưới và trên không chạy trên cùng một dòng, vì vậy họ chỉ có thể có được một số mẫu thuần khiết, hầu hết đều được lai, chưa kể đến những thứ không trong sạch, lãng phí thời gian và dung môi!
Đó cũng là lý do tại sao mẫu cần mỏng!
Sau khi chọn cột, việc thêm silicone có thể được thực hiện thông qua kênh cho ăn. Đồng thời, hãy chắc chắn đeo mặt nạ và hoạt động trong mui xe. Lý do cho điều này sẽ không được xây dựng bởi các blogger (silicosis).
Đối với sự xâm nhập của silica gel, quy trình được khuyến nghị là: Đầu tiên, đặt cột silica gel với silica gel được lắp đặt theo chiều dọc, làm phẳng bề mặt của gel silica bằng tay của bạn, kết nối đáy cột silica gel với bơm nước, bơm ra silica gel, rồi đổ vào độ đệm của cực nhỏ. Khi rửa giải sắp rò rỉ, hãy đóng van tắt để ngăn dung môi được bơm vào bơm nước.
Sau đó, dưới áp lực, gel silicon có thể được ngâm đồng đều bằng cách xả bảy hoặc tám thể tích cột với lượng tác nhân phát triển nhỏ nhất.
Mẫu ở trên
Lấy mẫu được chia thành lấy mẫu ướt và lấy mẫu khô.
(1) Lấy mẫu ướt.
Phương pháp được khuyến nghị là sử dụng một pipet với đầu cao su để hút mẫu, gần với phần trên cùng của gel silicon, từ từ và nhỏ giọt mẫu cho đến khi nó phủ một lớp, sau đó ngừng thêm mẫu và áp dụng một số áp lực để ngâm chất nhờn vào lớp gel silicon; Nhúng chất dầu vào lớp silicon và lặp lại quá trình này nhiều lần cho đến khi tất cả các mẫu được tải!
Một số sinh viên mới có thể tò mò tại sao hoạt động này được thực hiện thay vì phủ lớp dầu ướt như chất như vậy cùng một lúc?
Trên thực tế, hoạt động này có thể làm giảm chiều cao hiệu quả của lớp mẫu. Tại thời điểm này, sắc ký cột đã bắt đầu, và các mẫu tiếp theo giống như các dung môi đẩy các mẫu trước đó đến chất hấp phụ và giải hấp trong silica gel.
(2) như đối với lấy mẫu khô.
Trừ khi thực sự cần thiết, nó không được khuyến khích. Các mẫu rắn được khuyến nghị nhiều hơn để bị đánh hoặc kết tinh. "Các phương pháp vô đạo đức, ethyl acetate so với nước, sự kết tinh hỗ trợ dao động siêu âm của dầu sôi cao" và "chia sẻ một phương pháp kết tinh lại trong phòng thí nghiệm".
Lấy mẫu khô thường mang lại hai vấn đề; Một mặt, trong quá trình trộn mẫu, khả năng phản ứng giữa mẫu và silica gel tăng do nhu cầu tăng nhiệt độ để bay hơi quay; Mặt khác, tải khô có nghĩa là chất hấp phụ sẽ được đưa vào lớp mẫu, tăng chiều cao của lớp mẫu hoặc kích thước của cột, đòi hỏi nhiều thời gian hơn và nhiều dung môi hơn.
Nếu không có lựa chọn nào khác, chỉ cần đổ bột hấp phụ từ từ vào cột để tải, với một số yêu cầu tương tự như các phương pháp ướt.
Thêm natri sunfat hoặc cát thạch anh
Để tránh tác động đến lớp mẫu trong quá trình bổ sung rửa giải, gây ra sự không đồng đều, biến dạng và ảnh hưởng đến hiệu quả phân tách, một lớp natri sunfat hoặc cát thạch anh thường được đặt trên lớp mẫu.
Các kỹ sư của chúng tôi cá nhân thích đặt natri sunfat khan vì nó cũng có chức năng sấy khô và thân thiện với các dung môi như dichloromethane, dễ bị bay hơi, hấp thụ nhiệt và ngưng tụ!
Sự rửa giải, lấy mẫu và thu gom gradient
Sau khi tải, lần đầu tiên rửa cột bằng dung môi cực nhỏ (dung môi sẽ không cho phép sản phẩm đi qua) cho các khối lượng 2-3 (một khối lượng cột được xác định là thể tích của pha di động chảy vào và ra) để đảm bảo tính đồng nhất, sau đó chọn tỷ lệ để thoát.
Làm thế nào để chọn chất rửa giải đi qua cột?
Tỷ lệ của độ rửa là tỷ lệ khi sản phẩm của bạn đạt giá trị RF là khoảng 0. 2 trên tấm TLC
Đây là kinh nghiệm rửa cột mà tôi đã đọc nhiều sách và chia sẻ, và quy trình thực tế cũng rất giống nhau. Cá nhân, tôi thích giảm độ dốc hai lần.
Ví dụ: nếu dung môi cho việc leo tấm TLC là PE/EA =2: 1, blogger có nhiều khả năng bắt đầu rửa giải gradient từ PE/EA =4: 1 và kết thúc tại PE/EA =2: 1, thường dẫn đến kết quả tốt hơn.
Ngoài ra còn có các kỹ thuật khi thu thập rửa giải. Trước tiên, bạn có thể chọn một ống nghiệm lớn hơn để nhận nó và khi TLC tiếp cận điểm mục tiêu, hãy chuyển sang ống thử nhỏ hơn. Điều này có thể làm giảm khả năng nhận nhiều hơn và tránh tạp chất.
Nếu bạn gặp phải các tình huống trong đó các điểm tạp chất và điểm sản phẩm gần nhau, đặc biệt là những điểm có huỳnh quang yếu, hãy nhớ không áp dụng áp lực. Thay vào đó, chọn vượt qua cột dưới áp suất bình thường và thay đổi ống mỗi khi kết nối một nửa hoặc ít hơn, điều này cũng có thể làm tăng xác suất tinh chế.
Hãy nhớ không xử lý trụ cột một cách kịp thời!
Nhiều người có thói quen cho rằng cột đã được truyền và sấy khô khi không có sản phẩm trong một hoặc hai ống sau TLC trong giai đoạn sau.
Tôi chỉ nhận ra rằng sản lượng quá thấp khi tôi tính toán nó, hoặc khi tôi đi làm một quang phổ, tôi thấy rằng phổ không chính xác và bỏ lỡ điểm sai. Tôi hối hận sâu sắc.
Vì vậy, bạn nên không vội vàng xử lý cột sau khi hoàn thành điểm mong muốn. Thay vào đó, thực hiện cộng hưởng từ hạt nhân để phù hợp với năng suất trước khi xử lý.
Nếu bạn đang bận hoặc vội vàng để thanh lọc các hợp chất khác với điều nàySắc ký cột thông thường, nên rửa sạch với dung môi hỗn hợp lành tính cao và để lại phần rửa giải này cho kết quả nhận dạng.
Chú phổ biến: Sắc ký cột thông thường, Nhà sản xuất sắc ký cột thông thường Trung Quốc, nhà cung cấp, nhà máy
Một cặp
Cột sắc ký nhỏTiếp theo
Sắc ký cột mao quảnGửi yêu cầu
